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GoldBio D-熒光素鉀鹽體內(nèi)使用手冊

更新時間:2024-04-08點擊次數(shù):1201

熒光素是一種常見的生物發(fā)光報告子,用于體外成螢光素酶。這種螢火蟲螢光素酶的水溶性底物(通常來自Photinuspyralis)

利用ATP和Mg2+作為共因子在氧氣的存在。通過ATP的利用,反應(yīng)可以進一步用于指示能量或生命的存在是為了起到生死攸關(guān)

的污點的作用。

螢火蟲螢光素酶是研究基因最chang用的報告基因之一表達(dá)由于其ji端的敏感性,以及快速,易于使用的系統(tǒng)。螢光素酶用于監(jiān)測

細(xì)菌、培養(yǎng)細(xì)胞以及轉(zhuǎn)基因植物或動物。它是一種約61kDa的蛋白質(zhì),作為單體具有活性,不需要加工其活動。螢火蟲螢光素

通過催化熒光素的氧化羧化作用產(chǎn)生具有任何已知生物發(fā)光中最gao效率之一的反應(yīng)。螢光素活性可以通過與啟動子/增強子的

相關(guān)性來表征基因調(diào)控元素。優(yōu)化后化學(xué)發(fā)光反應(yīng)和調(diào)節(jié)元件的轉(zhuǎn)錄活性。

本手冊旨在介紹一種簡單、經(jīng)濟、可靠的方法,用于在體外報告系統(tǒng)中檢測熒光素酶活性。

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生物發(fā)光反應(yīng):

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幾個因素可能會影響反應(yīng)的靈敏度,包括溫度、pH或底物濃度我們建議使用pH為7.8的緩沖液,并在使用前將所有試劑預(yù)熱

溫,以獲得最佳結(jié)果。GoldBio還建議添加在測定緩沖液中過量的ATP和Mg2+用于更好的反應(yīng)。

當(dāng)熒光素被添加到螢光素酶樣品中時,會立即產(chǎn)生閃光在0.3-0.5秒內(nèi)達(dá)到峰值強度。然后,光線開始迅速衰減一半壽命約為0.5

-1.0分鐘。但當(dāng)輔酶A最初加入測定緩沖液時能夠防止快速反應(yīng)衰變延長了反應(yīng)2-5分鐘。如果稍后添加到反應(yīng)中混合物,輔酶A也促進額外的二次閃光。

Gold Bio推薦基于Yuichi Oba等人(2003):

-100mM Tris-HCl(pH 7.8)

-5mM MgCl2

-250μM CoA

-150μM ATP(Fraga,2008)

-150μg/mL d-熒光素(GoldBio)

一些研究人員還添加了二硫蘇糖醇(DTT)或EDTA等成分(Steghans,1998)。您可以調(diào)整您的特定分析緩沖液以達(dá)到最

效果滿足您的需求。我們建議對您的特定細(xì)胞進行動力學(xué)曲線的初步測試以獲得最佳效果。

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